高速逆流色谱操作步骤和要点操作步骤【优秀范文】

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高速逆流色谱操作步骤和要点操作步骤：

　　1. 配液。超声脱气约 20min，脱气后静置冷却至室温后泵液。

　　2. 打开恒温水浴，将温度升至设定温度。

　　3. 泵固定相。以 10～20ml/min 流速泵入固定相，检测器出口端流出固定相约 20～50ml后停泵。

　　4. 平衡。打开紫外检测器开始预热，正转转动主机至 900rpm（FWD 为正转，REV 为反转），同时以 3ml/min 流速泵入流动相，至出口端流出流动相且此时紫外信号稳定，体系基本已平衡。

　　5. 进样。以体系的上、下相溶解一定量的样品，超声溶解均匀后，在装样注射器中倒入样品溶液，将进样六通阀切换至 load，推排气泡后吸液至样品全进入进样圈中，将 load切换至 inject，检测器、工作站调零开始记录。

　　6. 接收流分。工作站记录，设备运行时间为 500min，保存后采集数据，保存。

　　7. 清洗。断开泵与主机的连接，将主机进口与气管出口连接，吹气；将主机中溶剂吹出后，泵入约 50ml 清洗液，吹气，重复此过程 2～3 次；最后一次长时间（1 小时左右直至吹干）吹气时将主机内液体吹尽。

　　8. 关机。

　　操作要点：

　　本仪器适用于有机溶剂，316L 不锈钢及 PTFE 材料可耐受的酸碱溶液。

　　1. 本设备可承受的压力限制为 2MPa，请勿泵入不可溶解的固体颗粒。

　　2. 设备运行前先检查连接管路是否正确，是否紧密；检测器波长是否正确。

　　3. 配液时溶剂应混合均匀，自然分层澄清后可超声脱气，脱气时间不宜过长，脱气后如溶剂有温热则最好冷却静置至室温后使用。

　　4. 样品溶解可为体系上相或下相，或同时两相溶解，不可以单一的溶剂来溶解进样，以免破坏主机内的体系平衡。

　　5. 每次做完实验请及时清洗设备，一般清洗液为甲醇、乙醇等，如体系内含有酸、碱、盐等溶剂，建议先以纯净水清洗 1～2 次后，再以清洗液清洗。

　　6. 日常清洗完设备后，如需继续进行实验，请设备放置 2 小时后重新平衡。

　　7. 操作中如有气泡、流失或其他异常现象可致电上海同田生物技术有限公司技术支持部-8036。